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在體外診斷試劑的注冊申報過程中，江蘇為真生物醫藥技術股份有限公司的人PCA3、PSA基因檢測試劑盒（熒光PCR法）提供了一個典型的案例。

通過對這份審評報告的詳細分析，我們可以提煉出一些關鍵點，幫助企業更好地進行相應產品的注冊申報工作。

產品概述與預期用途

首先，明確產品的預期用途是注冊申報的基礎。

該產品用于體外檢測總PSA在4~10ng/mL（灰度區）的疑似前列腺癌患者尿液樣本中PCA3基因及PSA基因的表達量，通過計算PCA3基因與PSA基因表達量的比值，作為是否需要穿刺活檢的輔助診斷指標。

這一明確的預期用途不僅有助于產品的定位，也為后續的臨床評價提供了方向。

報告中詳細說明了PCA3和PSA的生物學特性，PCA3在前列腺癌中高表達，而PSA則具有組織特異性但不具備腫瘤特異性。

這些信息為產品的臨床應用提供了科學依據。

產品組成與檢驗原理

產品的組成成分和檢驗原理是審評的重要內容。

該試劑盒由人PCA3/PSA基因mRNA提取試劑和人PCA3/PSA基因檢測試劑兩部分組成，基于磁珠特異性捕獲和一步法PCR技術檢測原理。

詳細的組成成分和檢驗原理不僅有助于審評人員理解產品的技術路線，也為企業提供了在申報材料中詳細描述產品技術細節的范例。

報告中提到，尿液中PCA3、PSA mRNA的提取采用磁珠特異性捕獲方法，結合熒光PCR檢測技術，確保了檢測的靈敏度和特異性。

臨床前研究

臨床前研究是注冊申報的核心部分之一。

報告中詳細介紹了主要原材料的選擇、企業參考品和質控品的設置、生產工藝及反應體系研究、分析性能評估等內容。

在上，產品的主要原材料包括磁珠、捕獲探針、dNTP、尿嘧啶-DNA糖基化酶、RNase抑制劑、Taq酶、引物和探針等。

這些原材料均通過外購獲得，申請人對供應商進行了篩選，并制定了技術要求和質量標準，確保了原材料的質量可控。

企業參考品包括提取參考品、準確度參考品、陽性符合率參考品、特異性參考品、PCA3交叉特異性參考品、PSA交叉特異性參考品、線性參考品、定量限參考品和精密度參考品。

質控品包括陽性質控品和陰性質控品，用于檢測過程中的質量控制。

申請人對試劑盒的反應體系進行了詳細的研究，包括捕獲液中HEPES濃度、LiCl濃度、磁珠用量、捕獲探針用量、引物探針濃度、DNA聚合酶用量、逆轉錄酶濃度、UDG酶濃度、鎂離子濃度、dNTP濃度、PCR反應體積、PCR模板體積等的確定，以及UDG酶作用溫度和時間、逆轉錄溫度時間、PCR反應退火溫度與時間、反應循環數等反應條件的優化。

分析性能評估是注冊申報中的重要環節，直接關系到產品的質量和可靠性。

報告中詳細介紹了該產品在分析性能評估方面的具體內容和結果。

3.4.1  核酸提取性能

申請人采用試劑盒包含的提取試劑，對高值前列腺癌樣本進行提取，評價提取濃度、純度等性能。

結果表明，該核酸提取試劑的提取性能符合研制設計要求，能夠有效富集目標基因，確保后續檢測的準確性。

3.4.2  準確性

申請人采用三批成品試劑盒，對準確度參考品、陽性符合率參考品進行檢測，結果符合接受標準。

同時，選擇了若干例臨床確診為前列腺癌或非前列腺癌的臨床尿液樣本，與數字PCR方法同步進行真實臨床尿液樣本檢測。

測試結果顯示，本檢測試劑檢測結果與數字PCR方法檢測結果一致性良好，濃度檢測結果符合接受標準，證明了試劑盒的準確性。

3.4.3  精密度

申請人使用三批試劑，分別對中陽性、臨界陽性和陰性3個水平的樣本，進行了20天的多次檢測，對批內/間、操作者間、日內/間、室內精密度和室間精密度等進行了評價。

結果表明，精密度良好，PCA3基因和PSA基因檢測濃度對數值的變異系數（CV%）≤5%；PCA3 Score值的變異系數（CV%）≤20%，確保了檢測結果的一致性和可重復性。

3.4.4  檢出限

申請人使用三批試劑，檢測兩個靶基因不同濃度梯度的樣本，將≥95%陽性檢出率的濃度水平作為確定的檢出限，并進行檢出限驗證。

最終確定PCA3檢出限不高于1000 copies/mL；PSA檢測限不高于6000 copies/mL，確保了試劑盒在低濃度樣本中的檢測能力。

3.4.5  分析特異性

分析特異性研究包含交叉反應和干擾試驗。

申請人對PSA基因之間的交叉、與非靶標的交叉以及檢測樣本相關常見微生物（白色念珠菌、大腸桿菌、肺炎克雷伯菌、奇異變形桿菌、假單胞菌、金黃色葡萄球菌）的交叉反應進行研究，結果顯示，檢測試劑與上述病原體無交叉。

申請人對尿液常見的外源及內源干擾物質進行研究，結果顯示，白蛋白（≤60g/L）、未結合膽紅素（≤342μmol/L）、膽固醇（≤13mmol/L）、葡萄糖（≤55mmol/L）、血紅蛋白免疫球蛋白G（≤32mg/L）、甘油三酸脂（≤37mmol/L）等干擾物質未對檢測結果產生干擾影響，確保了試劑盒在不同樣本條件下的特異性。

3.4.6  線性

申請人采用三批成品試劑盒，對包含高濃度靶基因的樣本進行梯度稀釋后重復檢測，確定PCA3樣本線性范圍為1.25 × 103 copies/mL~1.25 × 10? copies/mL、PSA樣本線性范圍為6.25 × 103 copies/mL~6.25 × 10? copies/mL，確保了試劑盒在不同濃度范圍內的檢測準確性。

陽性判斷值研究

陽性判斷值的確定是體外診斷試劑注冊申報中的關鍵環節。

該產品通過ROC曲線分析，確定了Score值>40.1518時檢測結果為陽性，Score值≤40.1518時檢測結果為陰性。

這一科學合理的陽性判斷值研究為產品的臨床應用提供了可靠依據。

申請人采用總PSA在4~10ng/mL的疑似前列腺癌患者的尿液樣本212例，使用申報產品對臨床樣本進行檢測并計算Score值，與臨床診斷結果進行對比，經ROC曲線分析，根據約登指數最大原則，確定了陽性判斷值。

穩定性研究

穩定性研究是確保產品在儲存和使用過程中保持性能穩定的重要環節。

報告中詳細介紹了實時穩定性、使用穩定性、樣本穩定性等研究結果，支持了產品說明書中的儲存條件及有效期聲明。

在實時穩定性研究中，申請人將試劑盒在規定的儲存條件下（組分1于2~8℃保存，組分2于-20℃±3℃中保存，其中2xPCA3反應液和2xPSA反應液于-20℃±3℃避光保存）放置一定時間（如0、3、6、9、12個月），定期取出試劑盒進行檢測，評估其性能是否發生變化。結果表明，試劑盒在儲存期間性能穩定，符合預期要求。

在使用穩定性研究中，申請人評估了試劑盒在開封后的穩定性。

結果顯示，試劑盒開封后在2~8℃條件下可穩定儲存不超過48小時，支持了說明書中的聲明。

樣本穩定性研究方面，申請人考察了不同儲存條件下樣本的檢出性能。

結果表明，處理后的尿液樣本在2~8℃下可保存不超過3天，在-20℃±3℃下可保存不超過12個月，在-80℃以下也可保存不超過12個月，且避免反復凍融，凍融次數不得超過5次。

這些研究結果為樣本的采集、儲存和運輸提供了科學依據，確保了檢測結果的可靠性。

臨床評價

臨床評價是注冊申報中不可或缺的一部分。

該產品在四家臨床試驗機構開展了臨床試驗，采用試驗體外診斷試劑與臨床參考標準進行比較研究，結果顯示針對tPSA在4~10ng/mL的疑似前列腺癌患者，試驗體外診斷試劑具有較好的臨床性能。

申請人在上海市第十人民醫院、復旦大學附屬華東醫院、昆山市第一人民醫院和浙江省人民醫院共四家臨床試驗機構開展臨床試驗，采用試驗體外診斷試劑與臨床參考標準進行比較研究，同時進行臨床常規使用的游離PSA與總PSA比值（fPSA/tPSA）與臨床參考標準比較研究，并進一步比較試驗體外診斷試劑與fPSA/tPSA的臨床性能，從而確認試驗體外診斷試劑的預期用途，其中，臨床參考標準采用穿刺活檢病理結果。

臨床試驗共前瞻性納入556例疑似前列腺癌患者，主要包括總PSA（tPSA）在4~10ng/mL的疑似前列腺癌患者。

試驗體外診斷試劑檢測樣本類型為尿液樣本，PSA指標檢測樣本類型為血清。

臨床試驗結果顯示，針對tPSA在4~10ng/mL的疑似前列腺癌患者，試驗體外診斷試劑與臨床參考標準對比的結果如下表所示：

fPSA/tPSA與臨床參考標準對比的結果如下表所示：

上述結果顯示，針對PSA在4~10ng/mL的疑似前列腺癌患者，試驗體外診斷試劑具有較好的臨床性能。

產品受益風險判定

在綜合評價意見中，審評中心指出該產品的上市為適用人群帶來的受益大于風險，但需要在說明書中提示相關信息。

這一部分內容提醒企業在申報時需充分考慮產品的受益與風險，并在說明書中明確提示相關信息，以保障產品的安全性和有效性。

報告中提到，產品不能單獨決定是否需要穿刺活檢，臨床醫生應結合患者的臨床表現和其他實驗室檢查等指標進行綜合分析，做出診斷。

最后的話

通過對江蘇為真生物醫藥技術股份有限公司的人PCA3、PSA基因檢測試劑盒（熒光PCR法）審評報告的分析，我們可以看到，明確的產品預期用途、詳細的組成成分和檢驗原理、嚴格的臨床前研究、科學的陽性判斷值研究、充分的穩定性研究、可靠的臨床評價以及綜合的受益風險判定是注冊申報成功的關鍵。

文章轉載自公眾號